Forum Zero - Türkiyenin En İyi Online Oyun Forumu

   


Go Back   Forum Zero - Türkiyenin En İyi Online Oyun Forumu > Eğitim Dünyası > Lise Ansiklopedisi > Biyoloji


Biyoteknoloji

Biyoloji


Cevapla
 
LinkBack Seçenekler Arama Stil
Alt 22 Ekim 2013   #1
....
Perfect - ait Kullanıcı Resmi (Avatar)
Üye Profil Bilgileri
Üyelik tarihi: 26 Ağustos 2012
Alter: 26
Mesajlar: 4.953
Konular: 1293
Rep Puanı: 29838
Rep Gücü: 4959
Rep Derecesi : Perfect has a reputation beyond reputePerfect has a reputation beyond reputePerfect has a reputation beyond reputePerfect has a reputation beyond reputePerfect has a reputation beyond reputePerfect has a reputation beyond reputePerfect has a reputation beyond reputePerfect has a reputation beyond reputePerfect has a reputation beyond reputePerfect has a reputation beyond reputePerfect has a reputation beyond repute
Aldığı Teşekkürler: 123
Ettiği Teşekkürler: 182
Standart Biyoteknoloji

A-Klasik Biyolojik yöntemlerle elde edilen ürünler :
Alkollü içecekler
Süt ürünleri
Ekmek, sirke, limon tuzu, alkol vb. maya ürünleri
Diğer canlılardan insülin hormonu eldesi
Aşı, serum, interferon üretme
Leke çıkarıcı enzimler içeren deterjanlar
Kirli suların arıtımı
Penisilin ve türevleri vb. dir.
Tek hücre proteini
B-Biyo-Teknolojik yöntemlerin uygulama alanları ve elde edilen ürünler
DNA parmak izi
Bitki ve hayvan klonlama
Rekombinant canlılar elde etme
Bakteriler insan hormon ve enzimleri üretme
Kalıtsal hastalıkların önlenmesi
Biyolojik savaş araçları üretme
İnsan ömrünü uzatma
Genetik açıdan iyileştirilmiş yeni ırkların üretilmesi
Biyoteknoloji ve Genetik Mühendislik
Biyoteknoloji’ye başta tıp, gıda ve sağlık olmak üzere bir çok meseleyi çözebileceği ümidiyle bakılmaktadır.Rekombinant DNA teknolojisiyle bitki, hayvan ve mikroorganizmaları geliştirmek, doğal olarak var olmayan veya ihtiyacımız kadar üretilemeyen yeni ve az bulunan maddeler (ürünler) elde etmek için kullanılan teknolojilerin tümüdür.
Örnek: yağ, protein, aminoasit, vitamin, mikroelement ve lif gibi kalite etmenlerince iyileştirilmiş yeni bitki genotipleri geliştirmek (buğday,pamuk,mısır,domates..)
I. Bitki doku kültürü
Aseptik şartlarda yapay bir besin ortamında hücre, doku veya organ gibi bitki kısımlarından yeni doku,bitki veya bitkisel ürünlerin üretilmesidir.
Bitki doku kültürü şartları;
•Uygun bitki dokusu
•Aseptik koşullar (besi ortamı)
•Uygun büyüme ortamı (sıvı, katı), enerji kaynağı, tuzlar
ve büyüme düzenleyicileri
•Kök ve gövde oluşumu sağlayan kültürleme
•Yeni bitkilerin uygun toprağa alınması




Bu yöntemde;
1.Uygun doku: çoğunlukla sürgün uçları ve meristemi kullanılır
2.Aseptik koşullar:Çalışma ortamının mantar,bakteri ve virüslerden arındırılması, ayrıca çalışılan dokunun zarar görmemesi
3.Büyüme (Besin) ortamı
•Makro elementler (azot, fosfor,sodyum,magnezyum, kükürt, vb.)
•Mikro elementler (demir, manganez, çinko, bakır,vb.)
•Vitaminler (tiamin, nikotinik asit, vb.)
•Şekerler (sakkaroz, glikoz, vb.)
•Jel yapıcı maddeler (agar, fitajel, jelatin, vb.)
•Amino asitler (glisin, arginin, vb.)
•Bitki büyüme düzenleyicileri
4. İstenen özelliklere sahip kopya bitki üretimi:Kök, sürgün veya yaprakların oluşumunun sağlanması, Bu organlar, yeni meristematik hücrelerin farklılaşarak gelişmesi sonucunda oluşurlar
Doku Kültürü ile şu amaçlara ulaşılır:
• İstenilen zamanda,istenilen kadar üretim
• Türlerin kaybolma tehlikesi yok
• Standart kalitede ve bol miktarda üretim
• İstenildiği kadar bitkinin elde edilme kolaylığı
II. Mikro-çoğaltım (çelikleme) yöntemiyle bitki üretimi
Uygulanışı:
A:Kültüre alınıp çoğaltılacak bitki seçilir
B:Bitkiye ait meristem doku izole edilerek uygun besi ortamına alınır
C:Burada organogenezin (Kök ve gövde oluşumu) gerekleşmesi sağlanır
D:Uygun olan klonlar seçilir
E:Klon bitkilerin toprağa ekimi yapılır



Bitki biyo teknolojsinin faydaları
•İyi çiçek meyve gibi özelliklere sahip bitkilerin kontrollü üretimi
•Hızla olgun bitki üretimi
•Çoklu bitki üretiminde
•Tohum veya gerekli polinatörlerin yokluğunda tohum üretimi
•Mutasyona uğratılmış bitki hücresinden bütün bitkiyi elde etme
•Steril kaplarda bitki üretimi hastalıklardan ve patojenlerden büyük oranda korunmayı sağlar
•Tohumdan üreme ve gelişme şansı çok az olan bitkilerin üretimini sağlar; orkide
•Virüslerden ve diğer enfeksiyonlardan temiz bitkiler alt kültür ve tarım için stok olarak kullanılabilir.
Not: Yabancı genlerin bitkiye aktarımı ve transgenik bitki üretimi, kültürde yetiştirilen bitki kısımlarının(tek hücre veya hücreler) kullanılarak yapılır.
III. Rekombinant DNA ve Transgenik canlı üretimi
•DNA ve Genler tüm canlılar için yapı ve görev bakımından aynıdır.
•Replikasyon-transkripsiyon ve translasyon özellikleri ve sonuçları aynıdır.
•İki farklı DNA nın birleştirilmesinden Rekombinant DNA oluşur.
•Bu tür DNA ları taşıyan canlılara veya başka canlı türünden gen almış canlılara Transgenik canlı denir.
Gen klonlamasında aşamaları
Gen taşıyan DNA'nın (veya RNA) saf olarak elde edilmesi,
Genin yerinin belirlenmesi,
Genin çıkarılması,
Taşıyıcı (vektör) DNA'nın elde edilmesi,
Gen DNA'sının vektör DNA'sı ile birleştirilmesi,
Oluşan rekombinant vektör DNA'nın alıcı hücreye aktarılması,
Seleksiyon,
Gen ürününün kontrol edilmesi.



Biyoteknolojik yöntem
1.DNA izolasyonu: Bazı kimyasal maddeler ve enzimler ile canlı hücrelere ait hücre zarı veya canlı hücre duvarının yıkılıp DNA’nın ortaya çıkarılmasına DNA izolasyonu denir.
Bu uygulama hedef genin elde edilmesi için gereklidir. Hedef geni taşıyan DNA hücrelerden izole edilip saf olarak elde edildikten sonra restriksiyon endonükleaz enzimi ile kesilir.

2.Hedef genin vektöre eklenmesi: Kesilmiş DNA parçalarından işaretleniş hedef gen seçilir. Aynı endonükleazla kesilmiş ve vektör ödevi görecek yabancı DNA parçası (çoğunlukla plazmid) ile birleştirilir. Oluşan yeni DNA’ya rekombinant DNA, bu olaya ise rekombinasyon denir
Günümüzde yaygın olarak kullanılan vektörler bakteri plâzmitleri ve virüs DNA’larıdır.

Plasmid:
Bazı bakterilerde ana DNA dan başka halka şeklinde olan küçük DNA lardır. Plasmidlere farklı genlerin eklenmesi ile bakteri farklı özellikler kazanır.
Bunlar:
• Küçüktür (birkaç bin baz çifti)
• Genellikle tek bir veya birkaç gen taşıyabilecek yapılardır
• Daireseldir
• Tek replikasyon merkezi taşır
3.Rekombinat DNA nın bakteriye (canlıya) aktarılması: Bu şekilde bir vektör aracılığı ile elde edilen yeni plâzmid genellikle bir bakteriye nakledilir ve bakteri içerisinde çoğaltılarak rekombinat DNA klonları elde edilir.
4.Gen klonlama: Belirli bir DNA bölümünün kesilerek bir vektör içerisine konulması ve daha sonra bakteri içerisinde çoğaltılması işlemlerine gen klonlaması denir.
Gen klonlaması virüs, bitki, hayvan ve bakteri aracılığıyla gerçekleştirilebilir.
Konak hücreler:
Prokaryotlar
Bakteriler
Ökaryotlar
Bitki hücreleri
Memeli hücreleri
Konak bitki hücreleri:
•Yüksek yapılı bitkilere gen aktarmak için plasmid vektörler kullanılır.
•Toprak bakterisi Agrobacterium tumifaciens, bitki hücrelerini enfekte eder ve birçok farklı bitki türlerinde “gal” adı verilen tümörler oluşturur.
•Tümör oluşumu, bakterinin taşıdığı tümör-indükleyici (Ti) plasmidi sayesinde olur.



5.Hedef genin canlıya aktarılması: İzole edilip çoğaltılmış genle istenen canlılara uygun tekniklerle aktarılır.
a.Yabancı DNA’nın bakteri hücresine aktarımı



DNA’nın Hücreye aktarımı hücre zarının sıcaklık şoku ve yoğun tuz çözeltisi ile işleme sokulması sonucunda hücre zarındaki delikler genişler. Böylece rekombinant DNA hücre zarından içeri girer. Bu şekilde DNA’nın herhangi bir canlı hücreye aktarılmasına transformasyon denir.

b.Yabancı DNA’nın Hayvan hücresine aktarımı
I. Elektroporasyon yöntemi : Hücrelere kısa süreli elektrik akımı uygulanarak, DNA hücre zarında oluşan geçici deliklerden hücre içerisine aktarılır.
II. Biyolistik yöntemi : Hücre veya dokunun üzerine DNA kaplı parçacıklar içeren çok hızlı olan mermi ile ateş edilmesi tekniğidir.
III. Mikroenjeksiyon yöntemi : Çok ince uçlu iğneye sahip enjektör ile hücre zarı geçilip, doğrudan hücre çekirdeğine rekombinant DNA’nın enjekte edilmesidir.
IV.Retrovirüs aracılığıyla:Konak hücreyi enfekte ettikten sonra RNA, Ters transkriptaz enzimiyle çift zincirli DNA molekülüne çevrilir. Bu DNA, konak genomuna katılır ve hücre bölünmesi sırasında yavru hücrelere aktarılır.
c.Yabancı DNA nın bitki hücresine aktarımı
I. DNA tabancası:Bu yöntemle izole edilmiş hedef genler bitki hücresin yüksek hızlarla gönderilerek hücreye zarar vermeden girmeleri sağlanır.
II.Vektörlerle: Yüksek yapılı bitkilere gen aktarmak için plasmid özellikteki vektörler kullanılır.Bu amaçla Ti-plazmid kullanılmaktadır
T- DNA (Plazmid) neden önemlidir:
•Yabancı genler, Ti-DNA parçasının içine sokulur. Oluşan rekombinant Ti DNA yı taşıyan bakterinin bitkiyi enfekte etmesiyle, rekombinant plasmid bitki hücrelerine aktarılır.
•Ti-DNA konak hücre kromozomuna katıldığında, yabancı genler bitki genomuna girmiş olur.
Örnek:mikro-enjeksiyon tekniği ile insanda ve hayvanda insülin oluşumunu sağlayan gen bakteriye yerleştirilebilir. Bu şekilde bakterinin insülin üretmesi sağlanmış olur. Bakteriler yoluyla insülin üretilmesi kolay ve ucuzdur.
Örnek:Nergis bitkisinden alınan beta-karoten geni bir bakteri aracılığıyla pirinç bitkisine aktarılarak, pirinç bitkisinin (Altın pirinç) beta karoten üretme sağlanmıştır.Pirinçle beslen toplumlarda A vitamini eksikliğine bağlı hastalıkların (Kseroftalmi) önüne geçilmiştir.

Araçlar ve Enzimler
A.Gen klonlaması sırasında kullanılan araçlar:
Virüsler:
1-DNA virüsleri: DNA-----------mRNA---------------Protein
2-RNA virüsleri: mRNA---------cDNA----------mRNA-------------Protein

B.Gen klonlaması sırasında kullanılan enzimler :



1. Bir hücrenin DNA zincirini, farklı yerlerinden ve istenen uzunlukta kesilmesini sağlayan enzimler restriksiyon endonükleaz enzimidir.



2. Kesilen DNA parçalarını birbirine ekleyen enzim ligazdır.

[Üye Olmadan Linkleri Göremezsiniz. Üye Olmak için TIKLAYIN...]

3. DNA polimeraz enzimi DNA moleküllerinin çoğaltılmasını sağlayan enzimdir. Çoğaltılmak istenilen DNA parçasının bir zincirin dizilimi bilindiğinde polimeraz enzimi aracılığı ile yeni DNA zincirleri elde edilir.
4.Ters transkriptaz :RNA dan cDNA sentezleyen enzim
5. DNA eşlenmesinde başlangıç nukleotidlerini (RNA) yerleştiren Primaz enzimdir
IV. Gen tedavisi
Sahip olduğu mutant (zararlı) gen taşıyan somatik hücreye bunun yerine normal (sağlıklı) aleli sokmaktır.
Sağlıklı genlerin hücreye sokulması, bir vektör yada gen sistemi ile başarılmaktadır.
Gen tedavisi genin aktarıldığı hücre tipine göre iki gruba ayrılır:
1.Somatik gen tedavisi: yeni genler vücut (somatik ) hücrelerine transfer edilmekte ve sadece tedavi edilen bireyi etkilemektedir.
2.Eşey (germ) hücre tedavisinde : insan eşey hücreleri tedavi edilmekte ve genetik değişimler yeni kuşağa da aktarılmaktadır.
V. Jel Elektroforez ve DNAparmak izi
Bir DNA parmak izi oluşturmak için aşağıdaki yol takip edilir.



1. DNA hücreden izole edilir
2. DNA endonükleaz enzimleri ile kesilir
3. Kesilmiş DNA bir elektroforezdeki jel üzerine yerleştirilir
4. Negatif yüklü DNA lar elektroforezdeki pozitif uca doğru hareket ederler
5.. Sistem kapanır ve DNA lar özel boyalar ve radyoaktif tekniklerle gözlenir şekilde işaretlenmiştir.



DNA parmak izi
Rekombinant DNA tekniğinin kullanım alanlarından birisidir. Bir insanın DNA'sını oluşturan nükleotit dizisi ile diğer insanın DNA'sını oluşturan nükleotit dizisi birbirinden farklıdır. buna göre iki farklı insanın DNA'sında her 100 nükleotitde 1 veya 2 nükleotit gibi farklılıkların olduğu anlaşılmıştır.
Restriksiyon enzimleri DNA yı belli nukleotid tekrar bölgelerinden keserler. Aynı DNA larda aynı tekrarlar olduğu için kesimleri sonunda aynı parçalar oluşur.Farklı DNA ların kesiminde benzer parça oranı DNA lar arasındaki benzerliği verir. Bu şekilde kesilmiş DNA ların elektroforezde karşılaştırılması ile benzerlikleri tespit edilir.Bu yönteme DNA parmak izi denir.
Uygulanışı:
Aynı kesici enzimle DNA’lardan farklı büyüklükte ve sayıda DNA parçaları elde edilir. Bu DNA parçaları jel içine enjekte edilir. Elektroforez adı verilen bir yöntemle farklı uzunlukta DNA parçaları birbirlerinden ayrılır. Kısa olan DNA parçalarının hareketleri uzun olanlara göre daha hızlıdır. DNA parçaları jel üzerinde büyüklüklerine göre belirli uzaklıklarda bantlar oluşturur. Bu bantlaşma her bireyin kendine özgüdür. Buna DNA parmak izi adı verilir. Bu yöntemle adli olaylarda şüphelinin DNA'sı olay yerinde bulunan DNA'larla karşılaştırılarak suçu gerçekten işleyip işlemediği belirlenebilir. Ayrıca DNA parmak izi şüpheli çocuğun adli tıpta ana-baba tayininde de kullanılır.

VI. Monoklonal antikor teknolojisi ve Hibridoma
Monoklonal antikor teknolojisi İle, antikorların saf halde ve oldukça büyük miktarlarda üretilir.Bu amaçla biyoteknoloji kullanılarak sürekli olarak antikor üreten "hibridoma" adı verilen hücreler elde edilir
Hibridoma teknolojisinin temelinde üç bilgi bulunur:
1- B-lenfositleri tek bir antijene özgü antikor üretip salgılayan, yaşam süreleri birkaç günle sınırlı kan hücreleridir.
2- Tümör hücreleri bölünerek çoğalma kontrolünü kaybetmiş, hızla üreyen ölümsüz hücrelerdir.
3- Belli koşullarda aynı organizmaya ait değişik hücreler birleştirelerek her iki hücrenin özelliklerini taşıyabilen melez hücreler (hibridoma) elde edilebilir.
Hibridoma hücreleri B ya da T lenfositlerinin kanserli hücrelerle birleştirilmesi sonucu oluşur, bir taraftan sürekli bölünürken diğer taraftan antikor ya da T hücresi reseptörleri meydana getirir.
Bu şekilde antikor üretimine monoklonal antikor teknolojisi denir.
Özetle Biyoteknolojik yöntem
Biyoteknolojik yöntemler aracılığıyla klonlanmak istenen DNA bölümleri restriksiyon endonükleaz enzimi ile kesildikten sonra vektör olarak kullanılacak hücrenin plazmiti içerisine yerleştirilir ve DNA ligaz enzimi ile birleştirilir. Bu şekilde elde edilen yeni plazmit genellikle bir bakteriye aktarılarak çoğaltılır. Biyoteknolojide kullanılan vektörler bakteri plazmitleri ve virüslerdir. Kesilmiş bir DNA parçacığının yabancı DNA parçacığı ile birleştirilmesi sonucu ortaya çıkan DNA'ya rekombiant DNA denir. Rekombinant DNA'ya sahip canlıya transgenik canlı denir. Biyoteknolojide rekombinant DNA elde edilmesine yönelik tekniğe gen klonloması denir.
Gen klonlamasında önemli olan aşamalar kısaca şöyledir (genel prensipler).
Gen taşıyan DNA'nın (veya RNA) saf olarak elde edilmesi,
Genin yerinin belirlenmesi,
Genin çıkarılması,
Taşıyıcı (vektör) DNA'nın elde edilmesi,
Gen DNA'sının vektör DNA'sı ile birleştirilmesi,
Oluşan rekombinant vektör DNA'nın alıcı hücreye aktarılması,
Seleksiyon,
Gen ürününün kontrol edilmesi.
Biyoteknoloji ürünleri
Transgenik bakteri ve virüsler (Biyolojik savaş)
İnsulin hormonu
Büyüme hormonu
Kan pıhtı eritici faktörü
Pıhtılaşma faktörleri
Kan düzenleme hormonları
Sığır büyüme hormonu
Hepatit-b,sıtma,dizanteri ve bazı hayvan hastalıkları için aşılar
Bitkilerde donmayı engelleyen bakteriler
Suların temizlenmesinde kullanacak bakteriler
50 nin üzerinde bitki türü (hastalıklara ve zararlılara dirençli)
Genetik olarak değişikliğe uğratılmış küçük ve büyük baş hayvanlar.
Et ve özellikle sütünde insan için kullanılacak kimyasallar (Hormon,enzim)bulunduran hayvanlar.
Hayvanlarda, insan kan özelliklerini taşıyan kan üretimi
Gelecekte Biyoteknoloji ile;
Biyoteknoloji sayesinde gelecekte canlılara ait genetik şifre çözülerek gen haritaları ortaya çıkacaktır.
Kalıtsal bir çok hastalık tedavi edilebilecek veya daha embriyo döneminde iken sağlam genlerle hasta genler değiştirilebilecektir.
İnsan ömrü uzayabilecek, anne ve babanın isteği doğrultusunda bebeğin cinsiyeti belirlenebilecek,
Kanser başta olmak üzere birçok hastalığa karşı koruyucu rekombinant aşılar geliştirilebilecektir.
İstenilen özellikte bitki ve hayvan türleri elde edilebilecektir.
DNA diğer hücre bileşenlerine göre daha kolay ve saf olarak elde edilebilir. Çünkü: DNA'nın kendine özgü bir kimyasal yapısı ve fiziksel özellikleri vardır.
Şöyle ki:
1) Bakterilerde kromozom uzunluğu oldukça büyüktür. Örn., E. coli 'de kromozom 1.1 - 1.4 mm uzunluktadır.
2) DNA, fiziksel ve kimyasal muamelelere oldukça dirençlidir. Halbuki, diğer hücre bileşenleri daha duyarlıdırlar ve kolayca tahrip olurlar.
3)DNA diğer hücre bileşenlerinden daha fazla özgül ağırlığa sahiptir.
DNA'nın bu özel karakterleri, hücre özütlerinden daha kolay ayrılmasını ve elde edilmesini sağlar. Özellikle, alkolde iplik görünümünde bir yumak oluşturması ve cam çubuğa yapışması, özütten kolayca ayrılmasına yardımcı olur.



Üye Profil Bilgileri
Perfect isimli Üye şimdilik offline konumundadır   Alıntı ile Cevapla
Cevapla

Seçenekler Arama
Stil

Yetkileriniz

Tüm Zamanlar GMT +3 Olarak Ayarlanmış. Şuanki Zaman: 09:21.

Sistem Bilgileri Bilinmesi Gerekenler
Powered by vBulletin® Version 3.8.4
Copyright ©2000 - 2017, Jelsoft Enterprises Ltd.
Search Engine Optimization by vBSEO 3.6.1
User Alert System provided by Advanced User Tagging v3.1.0 (Lite) - vBulletin Mods & Addons Copyright © 2017 DragonByte Technologies Ltd. Runs best on HiVelocity Hosting.
Lütfen Sorunlarınızı Buradan Bize Bildiriniz.

Sitedeki Tüm Paylaşımların Sorumlulukları Paylaşım Sahiplerine Aittir.
Soru Ve Sorunlarınız İçin Lütfen İletişim Bölümünü Kullanınız
Tema Tasarımı ForumZero.Net - Foxin


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204 205 206 207 208 209 210 211 212 213 214 215 216 217 218 219 220 221 222 223 224 225 226 227 228 229 230 231 232 233 234 235 236 237 238 239 240 241 242 243 244 245 246 247 248 249 250 251 252 253 254 255 256 257 258 259 260 261 262 263 264 265 266 267 268 269 270 271 272 273 274 275 276 277 278 279 280 281 282 283 284 285 286 287 288 289 290 291 292 293 294 295 296 297 298 299 300 301 302 303 304 305 306 307 308 309 310 311 312 313 314 315 316 317 318 319 320 321 322 323 324 325 326 327 328 329 330 331 332 333 334 335 336 337 338 339 340 341 342 343 344 345 346 347 348 349 350 351 352 353 354 355 356 357 358 359 360 361 362 363 364 365 366 367 368 369 370 371 372 373 374 375 376 377 378 379 380 381 382 383 384 385 386 387 388 389 390 391 392 393 394 395 396 397 398 399 400 401 402 403 404 405 406 407 408 409 410 411 412 413 414 415 416 417 418 419 420 421 422 423 424 425 426 427 428 429 430 431 432 433 434 435 436 437 438 439 440 441 442 443 444 445 446 447 448 449 450 451 452 453 454 455 456 457 458 459 460 461 462 463 464 465 466 467 468 469 470 471 472 473 474 475 476 477 478 479 480 481 482 483 484 485 486 487 488 489 490 491 492 493 494 495 496 497 498 499 500 501 502 503 504 505 506 507 508 509 510 511 512 513 514 515 516 517 518 519 520 521 522 523 524 525 526 527 528 529 530 531 532 533 534 535 536 537 538 539 540 541 542 543 544 545 546 547 548 549 550 551 552 553 554 555 556 557 558 559 560 561 562 563 564 565 566 567 568 569 570 571 572 573 574 575 576 577 578 579 580 581 582 583 584 585 586 587 588 589 590 591 592 593 594 595 596 597 598 599 600 601 602 603 604 605 606 607 608 609 610 611 612 613 614 615 616 617 618 619 620 621 622 623 624 625 626 627 628 629 630 631 632 633 634 635 636 637 638 639 640 641 642 643 644 645 646 647 648 649 650 651 652 653 654 655 656 657 658 659 660 661 662 663 664 665 666 667 668 669 670 671 672 673 674 675 676 677 678 679 680 681 682 683 684 685 686 687 688 689 690 691 692 693 694 695 696 697 698 699 700 701 702 703 704 705 706 707 708 709 710 711 712 713 714 715 716 717 718 719 720 721 722 723 724 725 726 727 728 729 730 731 732 733 734 735 736